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实验室里，你是否经历过这样的绝望时刻？精心准备的样本突然失活，WB条带消失得无影无踪；反复冻融的样品效价暴跌，ELISA检测结果低到怀疑人生，上样显色时比自己的脸都白；移液枪一抖，蛋白浓度直接“归零”……这些“隐形刺客”正悄悄吞噬着我们的蛋白！今天，我们就来揭开蛋白消失的真相，看看你的蛋白到底“跑”去了哪里。

一、EP管吸附：蛋白的“隐形黑洞”​​
​​现象：蛋白纯化、抗体分装保存后，浓度莫名降低，实验信号忽高忽低。真相却是材质陷阱：部分EP管（尤其是低质量塑料管）表面残留疏水基团，会吸附蛋白，尤其是低浓度蛋白（如<10μg/mL）损失率高达30%以上。不同厂家的EP管分装保存同一支检测抗体，ELISA实验时效价竟相差5倍以上。

解决方案：
选择低吸附、高纯度EP管（如聚丙烯材质），使用前用0.1% BSA或脱脂奶粉来进行预封闭或作为保护剂。
避免低浓度保存，尽量让待保存的蛋白或抗体的浓度在0.1mg/mL以上。
蛋白分装时避免接触管壁，用移液枪轻柔吹打混匀。

二、反复冻融：冰晶的“致命切割”​​
​​现象：蛋白、抗体反复冻融后活性丧失，ELISA试剂盒出现白板。结构崩塌：冻融过程中，冰晶形成会破坏蛋白三维结构，导致聚集或变性。实验显示，反复冻融5次的抗体或酶，活性保留率不足50%。剪切力伤害：冰晶融化时产生的微剪切力会直接撕裂蛋白分子。
高盐伤害：在冷冻过程中，由于低温环境导致盐离子（PBS等）加上冷冻时溶液体积减小，造成溶液中局部高盐环境，蛋白、抗体发生不可逆变性失活。

解决方案：
分装保存：单次用量分装（如50μL），-80℃长期保存，4℃短期使用。
添加保护剂：甘油（50%）、海藻糖或BSA可减少冰晶损伤，蛋白酶抑制剂防止降解。
冻干保护：作为赋形剂冻干保护剂中的蔗糖、海藻糖等。其在蛋白冻干后提供稳定的骨架来维持蛋白制品的空间结构。

三、移液器操作失误：手抖毁所有​
​​现象：加样量忽多忽少，实验组与对照组数据“离谱”。机械损伤：移液枪未校准、吸头不匹配或操作手法错误（如倾斜枪头）会导致蛋白溶液剪切力增加，引发变性。另外有数据表明，新手实验员在训练一个月以后实践结果CV值一般可提高10%以上。

解决方案：
定期校准移液枪，使用低吸附吸头（如硅胶吸头）。
勤加练习，告别手抖。
加样前离心蛋白溶液（12000rpm，3分钟），避免管壁残留。

四、分装转运“步步惊心”​​
​​现象：分装后的蛋白效价参差不齐，转运后直接报废。这种情况第一种原因是分装体积过小（如<10μL）易受蒸发和管壁吸附影响，导致浓度出现重大偏差。第二是温度波动：冷链运输中温度反复（如超4小时常温暴露），加速蛋白降解。

解决方案：
分装体积≥10μL，使用预冷EP管（-20℃）。
运输时加冰袋或干冰，尽量避免常温暴露。
使用冻干制品运输。

五、盲目相信“微量试剂盒、快速试剂盒”​
某ELISA试剂盒厂家的微量体系50μL(10μL样品+40μL样品稀释液)，或某一ELISA实验只需要半小时完成，最终导致实验趋势混乱，结果无法重复。这里要说明一下的是任何反应体系自己的最适体积，最适反应时间，需要有足够的量变来引起质变，而不是简单的等比例放大或缩小。拿最常用的酶标板来说，50μL的反应体系甚至都无法有效浸润整个酶标板孔底部，这种体系下的抗原抗体如何反应是值得推敲的。因此推荐最小反应体系应该≥100μL。

解决方案：
选择正规、合理的厂家、准备好足够的样本量、使用精确的移液器

结语：守护蛋白，从细节开始​

瑞迪生物ELISA试剂盒标准品、检测试剂均采用自主研发的高效冻干保护剂，蛋白抗体保护剂等，所有试剂均通过7天37℃稳定性（等效于4℃保存1年）。选用高纯度、低吸附EP管分装保存，最大程度的减少吸附和降解。同时生产引进高通量全自动移液站，相比人工生产，保证货期的同时将产品CV值降到了5%以下。