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瑞迪生物每个ELISA试剂盒内，均附有一份质检报告和说明书，里面包含各种各样的性能参数，它们都有什么意义呢？

01、质检报告
ELISA试剂盒内的质检报告单，表明该试剂盒在出厂前满足外观完整、组分齐全、无变质等标准规定，且符合标曲线性良好（R2≥0.99）、批内差小（<10%）等性能要求，保证各位研究员收到的试剂盒符合标准。

02、特异性
用试剂盒检测靶蛋白的相关类似物，并计算交叉反应率：

交叉反应率越低（通常＜10%），表明试剂盒的特异性越强。
例如：用人生长激素（GH）酶联免疫吸附测定试剂盒检测5000pg/mL的重组人CG、HGF、GM-CSF、IGF-1、FGF1、FGF4，重组的小鼠GH、CG、GM-CSF和大鼠GH、CG、GM-CSF，交叉反应性很低。

重组蛋白	浓度（pg/mL）	交叉反应率	重组蛋白	浓度（pg/mL）	交叉反应率
人CG	/	/	大鼠GH	51.44	1.0309%
人HGF	/	/	大鼠CG	48.658	0.9732%
人GM-CSF	/	/	大鼠GM-CSF	/	/
人IGF-1	/	/	小鼠GH	58.658	1.1732%
人FGF1	/	/	小鼠CG	47.946	0.9589%
人FGF4	/	/	小鼠GM-CSF	/	/

03、检测范围
研发过程中，研发部门会筛选指标最合适的检测范围，换算成冻干浓度后，进行标准品的冻干操作。如：一支冻干标准品的含量是500pg，则该试剂盒最高检测浓度为500pg/mL，两倍比稀释后的检测范围为7.81~500pg/mL。

04、灵敏度
测定标准品&样品稀释液（重复20次），计算出均值（x）和标准差（sd），均值加或减2倍标准差的值所对应的浓度，即为该试剂盒的灵敏度。

方法	夹心法	竞争法
灵敏度	x+2sd	x-2sd

05、典型数据
以标准品溶液考察试剂盒的OD值范围和相关系数。以四参数逻辑函数模型拟合标准曲线时，在试剂盒规定的标准浓度范围内，标准曲线的相关系数（R2）应≥0.99。

06、精密度
 板内精密度 
在同一实验室，由同一实验员使用低浓度样本、中浓度样本和高浓度样本，分别在1块板子上检测20次，样本浓度的变异系数（CV）＜10%。

 板间精密度 
在同一实验室，由至少3名实验员使用低浓度样本、中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次，样本浓度的变异系数（CV）＜10%。

板内和板间精密度的测定，是为了判断结果的再现性，是保证测值准确度的先决条件。

07、回收率
回收率是指样本可以回收吗？

回收率：向样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，计算检出值与实际值的比值——这是关于样本适用性（基质干扰）和测值准确度的验证。通常进行血浆、血清和细胞培养基的稀释回收率测试。瑞迪生物要求比值在80~120%。

例如：

标准品浓度(ng/mL)	样本及加标样本	实际浓度(ng/mL)	加标回收率(%)
200	小鼠血清原液	14.61	/
100	小鼠血清x10	15.86	/
50	小鼠血清x10+50ng/mL标准品	62.11	92.5%=(62.11-15.86)/50×100%
25	小鼠血清x10+25ng/mL标准品	45.58	118.88%6=(45.58-15.86)/25×100%
12.5	小鼠血清x10+12.5ng/mL标准品	30.62	118.08%=(30.62-15.86)/12.5×100%

 

08、稀释线性/稀释回收率
将含有或添加有高浓度待检物的样本进行多个梯度稀释（稀释前后的样本均应在试剂盒检测范围内），稀释后的样本浓度与未稀释（稀释倍数为1）样本浓度的比值即为稀释回收率。稀释回收率可排除样本基质、钩状效应、稀释手法的干扰。通常进行血浆、血清和细胞培养基的稀释回收率测试。稀释回收率在80~120%之间即为合格。

例如：

血清样品稀释倍数	实际浓度(ng/mL)	稀释回收率(%)
1（原液）	1461.43	/
2	1586.648	108.57%=1586.648/1461.43×100%
4	1601.584	109.59%=1601.584/1461.43×100%
8	1663.565	113.83%=1663.565/1461.43×100%
16	1254.087	85.81%=1254.087/1461.43×100%

09、样本测值
研发阶段，研发人员会对ELISA试剂盒进行对应种属的血清、血浆和实验室常规细胞样本的验证。大小鼠试剂盒还包含心、肝、脾、肺、肾、脑等组织匀浆的验证；人源试剂盒还包含尿液、唾液等样本的验证。

但是，由于细胞上清样本会受到多种因素影响，例如细胞类型、细胞数量、细胞的生长状态、培养基组分、干预物质、体系的pH值等，ELISA方法检测有可能出现测值异常（如假阴性的情况），请及时联系专业的技术支持（曾老师15327141758；麻老师15342250750）进行咨询解答。